(1)外植体材料的采集。枣树组织培养所用外植体包括冬季、春季休眠芽、春季室外萌发的嫩枝及培养室内根蘖培芽等。
(2)启动培养基。
枣树培养基中启动培养基品种间差异较大,以低浓度激素效果较好。
例如,梨枣:MS+BA0.5+NAA0.1;木枣:MS+BA1+NAA0.05;金丝小枣:MS+BAI+NAA0.1(单位:毫克/升)。
(3)分化培养基。
影响分化培养基的因子有无机盐的浓度、激素的种类、激素水平及相互配比、蔗糖浓度、有机物添加浓度和pH值。
例如几个品种的最佳分化培养基为:木枣:MS+BA3+NAA0.01;梨枣:MS+BA2+NAA0.05;金丝枣:WP+BA4+KT2+NAA0.05+LH300;赞皇大枣:WPM+BA4+KT2+NAA0.1+LH200+蔗糖2%(单位:毫克/升;pH6.5)。
(4)生根培养基。
在枣树试管苗生根阶段,无机盐浓度、蔗糖浓度及细胞分裂素类的水平应降低,而生长素类的浓度则应升高。
下面是几个品种的最佳生根培养基:木枣:1/2MS+BA2;梨枣:1/2MS+BA1+NAA0.5;金丝小枣:WP+BA0.8+KT2+NAA0.05+LH300;(单位:毫克/升;pH6.5;蔗糖浓度1.0%)。
(5)培养条件。
温度28~32℃;光照强度3000勒克斯,并进行瓶底遮光处理。
每日光照时间10~12小时,继代周期40天。
试管苗在瓶内生根后,不打开瓶口移到温室移植棚进行,时间可长可短,视苗木粗度而定。
进行一段时间的闭瓶炼苗后,需打开瓶口膜,在90%以上的湿度条件下,进行开瓶炼苗7~10天。
(6)过度移栽。当试管苗高度达4厘米以上,叶片有6~12片即可出瓶。移栽基质可用珍珠岩和混凝土3∶1混合或蛭石。
(6)枣树组培“三率”指标。分化率5.0%左右;生根率98%以上;移栽成活率90%以上。
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