胚胎干细胞形态特点

基/本/信/息

细胞名称：hESC(H9)人胚胎干细胞

组织来源：内细胞团

性别来源：女性

细胞形态：球形克隆

生长特性：贴壁生长

支原体检测：阴性

背景简介：hESC（H9）细胞株来源于人胚胎干细胞，贴壁生长，呈克隆状，可在hESC/iPSC完全培养基中快速增殖，边缘分化的细胞则在该培养基中生长较慢，通过选择性扩增获得高纯度人多能干细胞。

细/胞/鉴/定

结果分析：通过电镜观察、荧光免疫法及流式细胞法验证，本项目实验表明培养的人胚胎干细胞（ESCH9）鉴定正确，适用于科研应用。

试/剂/准/备

1.完全培养基配制（500mL）：按说明书在4℃条件下解冻hESC/iPSCGrouthSupplementsA/B，混匀至hESC/iPSC完全培养基，4℃储存，2周内使用。

初培养扩建时，先配置100mL，确保2周内使用完毕。

可分装冷冻保存，具体比例参考配置说明，冷冻总次数不超过2次。

2.Matrigel铺板：按照操作说明，将Matrigel分装至1.5mLEP管，标记后置于-20℃冰箱预冷1小时。

解冻后，分装至无菌EP管中，冰上保存。

铺板时，将Matrigel与DMEM/F12按比例混合，混匀后分装至6孔板，室温放置1小时后使用或冷藏过夜。

培/养/操/作

复苏hESC/iPSC：在37℃水浴锅预热条件下，将Matrigel包被的6孔板恢复至室温。

按比例加入hESC/iPSC完全培养基+hESC/iPSCSupplementC，恢复至室温。

解冻细胞悬液，酒精擦拭冻存管表面，转移至离心管，加入DMEM/F12，轻柔混匀，离心，弃上清，重新配制细胞悬液，接种至孔中，置于培养箱培养。

传代hESC/iPSC：细胞汇合度达85%时，准备2mL/孔的完全培养基，按比例加入hESC/iPSCSupplementC，恢复至室温。

吸取孔内培养基，加入DPBS清洗，加入hESC/iPSCPassageSolution，孵育8-9分钟后消化细胞，收集至新培养基中，水平十字摇晃6孔板，接种至新板中，培养过夜。

冻存hESC/iPSC：当细胞汇合度达85%时，准备冻存管，加入hESC/iPSCCryopreservationSolution，吸取上清，加入DPBS清洗，加入hESC/iPSCPassageSolution，消化细胞，收集至冻存液中，梯度降温至-80℃冰箱过夜，次日转移至液氮罐。

注/意/事/项

收到细胞后，检查瓶完好性、培养液、干冰情况，如有问题及时联系。

阅读说明书，确保培养条件一致，使用相同条件的培养基。

复苏后前3天定期观察细胞状态，记录照片。

运输期间细胞不稳定，请及时联系提供技术支持。

仅用于科研目的。