暗视野显微镜原理

相差显微镜，是利用物体不同结构成分之间的折射率和厚度的差别，把通过物体不同部分的光程差转变为振幅（光强度）的差别，经过带有环状光阑的聚光镜和带有相位片的相差物镜实现观测的显微镜。

在观察活细胞和未染色的生物标本，因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位发生变化(振幅差)，这种振幅差人眼无法观察。就需要用相差显微镜进行观察。

暗视野显微镜是利用丁达尔(Tyndall)光学效应的原理，在普通光学显微镜的结构基础上改造而成的。

暗视野聚光器，使光源的中央光束被阻挡。

不能由下而上地通过标本进入物镜。

从而使光改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。

临床上，暗视野显微镜常用于检查苍白的螺旋体。这是一种病原体检查，对早期梅毒的诊断有十分重要的意义。

暗视野显微镜常用来观察未染色的透明样品。

这些样品因为具有和周围环境相似的折射率，不易在一般明视野之下看的清楚，于是利用暗视野提高样品本身与背景之间的对比。

这种显微镜能见到小至4~200nm的微粒子，只能看到物体的存在、运动和表面特征，不能辨清物体的细微结构。

暗视野显微镜原理图

？这种检查是临床上较为先进的检查方式,一般的显微镜，人工或自然光源通过集光器反射到载物台和目镜内，即可看到载物台上物体和组织。

梅毒螺旋体是不易着色的微生物.折光性强.在普通的显微镜下就无法看清它。

当我们处在一问黑暗的房间内，可以看到漏进来的光柱中有尘埃在飞舞，利用这样的原理，我们在暗视野显微镜中所看到的不是直接反射的光线.而是照射在螺旋体上折射光，在黑色的背景下，梅毒螺旋体衬映得特别明显。

做暗视野显微镜检查关键在于取材，尤其是硬下溶、扁平湿疚和二期皮肤斑丘疹含有较多的梅毒螺旋体。

尽量选挥病期短、没有溃破的病损。

操作者放手套，用盐水棉球擦去病损表面的渗出物和结疵，用一手压紧或挤紧取材处的病损组织，另一手用手术刀刮或划破病损组织表面。

如渗出的是血液，应擦掉弃去，待渗出血清时，用干净的载玻片提取，这样才取材完毕。

遇见已经溃破的硬下疳，并发有细菌感染，取这样的材在显微镜下是看不清的，可以用一注射器，吸取L5毫升等接盐水，径皮穿刺入病人的腹股沟部位肿大的淋巴结内，注入后反复抽吸数次，最后将油出的液体涂于玻片上作标本用。

在暗视野显微镜下所看到的梅毒螺旋体，英特征有：①螺旋体整齐规则，固定不变;②梅毒螺旋体折光性比其它螺旋体强;②活动缓慢而有规律，即围绕其长轴旋转并前后运动，仲缩圈间之距离而运动，全身变曲如蛇形。

用暗视野显微锐检查病损内的螺旋体，是一个最古老的、最简单的、最可靠的检查梅毒的实验方法。

对早期诊断梅毒有十分重要的价值，其诊断牢约65%。

一般来说，如找到梅毒螺旋体，结合病史即可诊断为梅毒;如找不到，则不能认为不是梅毒。

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