食品卫生微生物学领域中,针对大肠埃希氏菌O157:H7/NM的检验,有一个专门的中文标准名称,即“食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验”。
这个标准在2008年5月16日首次发布,其英文标准名称为“Microbiologicalexaminationoffoodhygiene-ExaminationofEscherichiacoliO157:H7/NM”。
自2008年11月1日起,该标准开始实施,目前仍处于现行状态。
其标准编号为20050732-T-361,表明它是在特定的计划框架下制定的。
尽管没有提供具体的废止时间和被替代的国标号,但可以确认它是在一定的国际标准基础上制定的,但具体采用的国际标准编号和名称未在文中提供。
负责该标准的主管部门是卫生部,归口单位的技术委员会也是卫生部。
标准的起草工作由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所和湖北省疾病预防控制中心等机构共同完成。
关于标准的详细内容,包括方法、页数和价格信息,文中并未给出,可能需要从相关的官方渠道获取。
n115菌
肺部真菌感染的患者临床表现多样,影像学特征不典型,实验室病原学检查就成为诊断的重要依据,其中临床体液标本的涂片镜检和真菌培养应用最为广泛,该方法虽然在某些真菌感染的诊断中尚难以鉴别是定植还是感染,但其结果作为“微生物学证据”,无疑对于侵袭性真菌病的诊断和治疗都有重要的参考价值。
目前,临床上对不同体液标本镜检和培养结果的判断价值仍存争议,现就这一问题进行探讨,以期为临床诊治提供参考。
1.临床标本获取和处理
1.1合格痰标本的获取和处理
痰是呼吸道感染病原学诊断最重要最常用的临床标本,而痰标本采集方法的正确与否、痰标本是否合格同样是真菌培养能否检出病原菌的关键。
与细菌培养一样,真菌痰标本也应在临床怀疑肺真菌病及使用抗真菌药物之前采集,必要时应多次收集,并在2小时内送检,如不能及时送检应置于4℃保存,并在24小时内处理。
目前临床送检痰标本的合格率仅在40~60。
正确的方法采集方法是,嘱患者先行漱口,深咳嗽,然后留取脓性痰或分泌物送检。
无痰病人如需检查肺孢子菌,可用高渗盐水雾化吸入诱导痰液。
痰标本处理应遵循先涂片检查后培养的下呼吸道标本病原学检测原则,但临床实际工作中人们通常只注重痰培养,而痰涂片镜检常常被忽视。
必须强调的是痰涂片结果对临床有非常重要的间接和直接诊断价值。
首先,涂片镜检能够筛选出合格痰标本。
筛选时可挑取标本脓性部分涂片做革兰染色,当鳞状上皮细胞10个/低倍视野、多核白细胞25个/低倍视野,或两者比例1:2.5为合格痰标本。
其次,痰涂片可行苏木精-伊红(HE)或相关特殊染色直接镜检寻找病原体。
标本采集应力争在使用抗生素之前,清洁中段尿宜在早晨留取,使用惰性材料制成的广口无菌容器收集,加盖封闭保存。
留置导尿管收集尿液,应先消毒导尿管外部,按无菌操作方法使用注射器穿刺导尿管吸取尿液,忌从尿液收集袋中采集尿液[9]。
尿液标本室温下保存不超过2小时,4℃保存时间不超过8小时。
尿沉渣涂片镜检时,可取5~10ml标本3000~4000r/min离心30分钟后,取沉渣涂片直接镜检或行相关染色后镜检。
尿液培养可用接种环涂抹于相应培养基上,取离心后尿沉渣培养可以提高阳性率,培养18~24小时无菌生长时,应继续培养24小时后再观察。
1.6血液
血培养检测病原菌是侵袭性真菌病诊断中的重要依据之一。
其操作与常规细菌培养血标本采集相同,要注意无菌原则,在应用抗真菌药物前采血更佳,应采取不同部位的双份血进行培养;如果有留置血管内导管,至少应包括经导管采集的血标本;同时拔除导管者,应将导管尖同步送培养。
1.7胸水
36侵袭性真菌病患者可能出现胸腔积液[6],但胸水培养阳性患者并不多见,作为无菌腔液,其阳性有确诊价值。胸水标本需离心后取沉淀直接涂片镜检或接种培养。
2.临床标本阳性解读
2.1念珠菌
念珠菌临床标本分离率高,20~55的正常人痰中可以分离出念珠菌,且气道内定植常见,痰念珠菌培养阳性难以区分定植抑或感染,故临床意义有限,其阳性结果解释须慎重,即使经支气管镜下保护性毛刷刷检标本的培养阳性也不能作为诊断侵袭性念珠菌感染的依据。
临床研究显示患者痰和BALF念珠菌培养阳性,在未采取任何抗真菌治疗条件下,患者没有发生系统性感染,死亡率无增高[10,11]。
尽管有观点认为,多次痰培养阳性可以帮助除外念珠菌污染和定植的可能,但当前国内外指南均没有将气道标本念珠菌培养阳性作为诊断的微生物学依据,也不推荐以此为依据的抗真菌治疗[12]。
相对于培养,气道标本直接镜检的价值更大。
念珠菌属于酵母样真菌,在定植状态时,生长缓慢,数量少且多为孢子形态存在。
当镜检发现念珠菌形成假菌丝(芽生孢子),并在一定条件下转化为真菌丝,即可能成为感染的状态。
所以在合格痰标本、诱导痰或BALF中,直接镜检发现大量出芽菌体和念珠菌菌丝,说明其繁殖迅速可能处于致病状态。
念珠菌定植是发生侵袭性感染的先决条件,重症患者多部位念珠菌定植是发生侵袭性念珠菌感染的独立危险因素[13]。
定植指数(colonizationindex,CI)和校正定植指数(correctedcolonizationindex,CCI)运用临床标本的定量培养技术,帮助判断患者念珠菌定植负荷,能够指导临床对高危人群的早期发现和抢先治疗。
其判断标准如下,采集患者气道吸出物(痰)、咽拭子、胃液、尿和直肠拭子(粪便)5个部位的标本进行念珠菌半定量计数。
咽/直肠拭子念珠菌计数≥1×102菌落形成单位(colonyformingunit,CFU)/ml,胃液、气道吸出物和尿念珠菌计数≥1×105CFU/ml定义为阳性。
CCI=阳性部位总数/总标本数。
目前常用于肺孢子菌包囊和滋养体检测的染色方法有GMS染色法,瑞氏-吉姆萨染色法,巴氏染色法(Pap),荧光增白剂染料(CW)染色法。
研究显示GMS选择性染色肺孢子菌囊壁,诊断的敏感性为76.9,但特异性高达99.2[21];瑞氏-吉姆萨染色可染病原体的各阶段,适用于涂片镜检;巴氏染色(Pap)可染病原体周围被称作“泡沫体”的嗜酸性物质,是一种敏感性和精确度均可靠的诊断方法[19]。
部分无痰患者可经盐水雾化吸入诱导排痰,此法无侵入性亦有很高的敏感性。
PCP诊断最可靠的依据是在BALF或诱导痰中直接镜检发现病原体[22]。
3小结
在侵袭性真菌病诊治过程中,一方面存在对临床标本尤其是气道标本的镜检和培养的忽视和解读不充分,如忽视痰培养阳性结果的意义,片面认定污染和定植等情况,延误了治疗的最佳时机。
另一方面也存在高估结果临床价值的倾向,以气道标本培养阳性作为侵袭性真菌病临床诊断的“微生物证据”,从而导致过度治疗。
临床上应避免过分依赖新的微生物抗原检测或分子生物学检测方法,而忽视临床标本镜检和培养。
很多时候镜检可能是更为快捷、经济和可信的检测方法。
同时,标本真菌镜检和培养,应建立在合格的标本留取方法,规范的标本处理程序上,这样的结果才可能成为临床医生诊断中的有力证据。
而在临床解读中,需结合地区性微生物学特征,高危因素,临床表现及其他实验室检测结果做出综合判断。
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