(1)二甲苯(Ⅰ)15min
(2)二甲苯(Ⅱ)15min
(3)二甲苯:无水乙醇=1:12min
(4)100%乙醇(Ⅰ)5min
(5)100%乙醇(Ⅱ)5min
(6)80%乙醇5min
(7)蒸馏水5min
(8)苏木精液染色5min
(9)流水稍洗去苏木精液1-3s
(10)1%盐酸乙醇1-3s
(11)稍水洗10-30s
(12)蒸馏水过洗1-2s
(13)0.5%伊红液染色1-3min
(14)蒸馏水稍洗1-2s
(15)80%乙醇稍洗1-2s
(16)95%乙醇(Ⅰ)2-3s
(17)95%乙醇(Ⅱ)3-5s
(18)无水乙醇5-10min
(19)石炭酸二甲苯5-10min
(20)二甲苯(Ⅰ)2min
(21)二甲苯(Ⅱ)2min
(22)二甲苯(Ⅲ)2min
(23)中性树胶封固
注:①第(11)、(12)步可省去,(13)步冲水时间需延长至20-30min。
②第(21)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。(1)冰冻切片固定10~30s。
(2)稍水洗1~2s
(3)苏木精液染色(60℃)30~60s
(4)流水洗去苏木精液5~10s
(5)1%盐酸乙醇1~3s
(6)稍水洗1~2s
(7)促蓝液返蓝5~10s
(8)流水冲洗15~30s
(9)0.5%曙红液染色30~60s
(10)蒸馏水稍洗1~2s
(11)80%乙醇1~2s
(12)95%乙醇1~2s
(13)无水乙醇1~2s
(14)石炭酸二甲苯2~3s
(15)二甲苯(Ⅰ)2~3s
(16)二甲苯(Ⅱ)2~3s
(17)中性树胶封固。
注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
染色结果:细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。
细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。
胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。
着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。
例如,细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。
胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。
(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕;
(2)染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观。
苏木精染色是染什么的
苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining),简称HE染色法,石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
1、苏木精:
苏木精是染细胞核的优良材料,他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。它是淡黄色到锈紫色的结晶体,难溶于冷水和乙醚和甘油,易溶于热水和热酒精,溶于碱、氨和硼砂的溶液,。
分化时组织所染的颜色因处理的情况而异,用酸性溶液(如盐酸—酒精)分化后呈红色,水洗后仍恢复青蓝色,用碱性溶液(如氨水)分化后呈蓝色,水洗后呈蓝黑色。
2、伊红:
伊红(eosin)为酸性染料,将细胞质和细胞间质染为粉红色·切片在染色前需要脱蜡,染色后用中性树胶或DPX封片,以便长期保存,伊红是一种红色酸性染料.在微生物学实验中,用于鉴别产酸性细菌的一种培养基添加剂。
苏木精-伊红染色结果分析:
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。
细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。
胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。
着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。
例如,很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。
胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。
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