贯叶连翘HypericumperforatumL.是藤黄科金丝桃属(Hypericum)植物贯叶连翘的全草。
具有清热解毒、收敛止血、利湿等功效。
金丝桃素(Hypericin)是贯叶连翘中最具有生物活性的物质。
近年来的研究表明,金丝桃素具有抗抑郁、抗菌消炎、抗DNA和RNA病毒,促进记忆等药理活性[1]。
我国贯叶连翘资源丰富,但由于贯叶连翘全草中所含的金桃素仅有万分之几,所以只有通过化学方法对其进行提取和精制,才能达到国际市场对贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量大于0.3%的要求。
本实验对金丝桃素的提取、分离、纯化的工艺进行探讨,以提高产品中金丝桃素的含量。
1仪器与试药1.1仪器HP8453UV-Vis吸收光谱仪(美国惠普公司),RE-52A旋转蒸发仪,,HHS21-N电热恒温水浴锅。
1.2试药薄层层析硅胶G(青岛海洋化工有限公司),乙醚、乙醇、甲醇、醋酸乙酯乙醚为分析纯。
金丝桃素标准样品(购自美国Sigma公司,含量为85%)。
贯叶连翘(产地为甘肃)。
2方法与结果2.1金丝桃素的提取2.1.1预处理精确称取粉碎的贯叶连翘75g。
装入渗辘柱中,分批加乙醚进行渗漉,前1~4次分别加乙醚150,125,100,75ml合并渗漉液。
用旋转蒸发仪回收乙醚,即得除去叶绿紊等脂溶性物质的贯叶连翘。
2.1.2提取将乙醚处理过的贯叶连翘药粉装装入圆底烧瓶中,加乙醇200ml,在50℃的水浴锅中热浸提取2h后取出,冷却,过滤,滤液备用。
2.1.3TLC鉴定分别取滤液和金丝桃素对照品的乙醇液,点在薄层板上,在254nm的紫外灯下观察,均呈橙红色的荧光斑点,且二者的Rf值相同。
2.1.4进一步提取反复热浸提取,直到滤液经薄层层析检测不到橙红色的荧光斑点为止,合并滤液,减压浓缩为浸膏,然后将浸膏置于50~60℃的热水中。
用醋酸乙酯萃取,再将醋酸乙酯萃取物减压蒸馏,即得到金丝桃素粗提物。
2金丝桃素粗提物的分离工艺2.2.1树脂处理取1000gS898吸附树脂,加水浸泡48h,用蒸馏反复清洗干净。
加入3倍量的2mol/LNaOH溶液,浸泡5h,用蒸馏水洗至中性;加入3倍量的4mol/LHCl,浸泡8h,用蒸馏水洗至近中性;加入60%乙醇浸泡10h,再用蒸馏水反复清洗至无乙醇气味,最后用蒸馏水浸泡待用[2]。
2.2.2金丝桃素的分离工艺称取20.0g金丝桃素粗品,用500ml60%乙醇溶解,在50℃的水浴中提取2h,过滤;滤液上S898吸附树脂,然后用无水乙醇洗脱,收集流出液,在真空度为0.08mPa,温度为60℃的水浴条件下浓缩3.5h,并在60℃的干燥箱中烘干。
再将其用200ml丙酮溶解,过滤,滤液上硅胶柱。
收集流出液,浓缩干燥后得红色的金丝桃素产品。
2.2.3总金丝桃素含量测定将上述产品加入200ml甲醇中充分溶解,过滤,弃去残渣。
取5ml滤液放入容量瓶中,用甲醇定容至100ml。
以甲醇为空白,用HP8452UV�Vis吸收光谱仪测定,取589nm处吸光度,按下列公式[3]:
总金丝桃素的质量含量=(A589×600)/(样品质量×870)进行计算。每份样品平行测定3次,取平均值。
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